大家逆转录后用于PCR的CDNA有没有稀释

大家逆转录后用于PCR的CDNA有没有稀释

1。你可以做一个CDNA的琼脂糖凝胶电泳，跑的时候加上MAKER，然后对比在相同剂量下的亮度比，来推算CDNA的浓度。 模板的标准量如下，而且注意事项如下，我们一般加2ul

template DNA (1 μg genomic DNA, 0.1-1 ng plasmid DNA) in 10 μl
模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改
2。就是做PCR摸条件，我个人比较喜欢这种方法
（1）电泳结果出现非特异性条带，说明模板加的过量了，你可以根据非特异条带的亮度来判断浓度以决定减少多少的量
（2)电泳结果目的条代出现但是很弱,加大模板的量
（3）出现假阴性：增加模板的量

如果提取rna是为了测定基因的相对表达量，那么逆转录时各样本间总rna的量要保持一致，就像你说的a加1.5，b加1，使得总量为3ug。这样才能保证在之后rt-pcr比较基因表达量时，各个样本都站在同一起跑线上。

如以上回答内容为低俗、色情、不良、暴力、侵权、涉及违法等信息，可以点下面链接进行举报！

点此我要举报以上问答信息！