利用噬菌斑的形态和特点，可进行噬菌体的鉴定，分离和计数吗

利用噬菌斑的形态和特点，可进行噬菌体的鉴定，分离和计数吗

噬菌体的分离纯化及效价的测定

1
目的

1.1
了解噬菌体效价的含义及其测定原理。

1.2
学会检查噬菌体的方法。

1.3
掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。

2
原理

噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，
其个体形态极其微小，
用常规
微生物计数法无法测得其数量。
当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，
释放出
大量子代噬菌体，
然后它们再扩散和侵染周围细胞，
最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变
清，
或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑──噬菌斑。
了解噬菌体的特性，
快速
检查、分离，并进行效价测定，对在生产和科研工作中防止噬菌体的污染具有重要作用。

检样可以是发酵液、空气、污水、土壤等（至于无法采样而需检查的对象，可以用无菌
水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品）
。为了易于分离可先经增殖培养，使样品中的噬菌体
数量增加。

采用生物测定法进行噬菌体检查，
约需
12h
左右，
因而不能及时判断是否有噬菌体污染。
通过
快速检查可大致确定是否有噬菌体污染
，
以采取必要的防治措施。
根据
正常发酵
（培养）
液离心后菌体沉淀，
上清液蛋白含量很少，
加热后仍然清亮；
而侵染有噬菌体的发酵
（培养）
液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白，
加热后发生蛋白质变性，
因而在
光线照射下出现丁达尔效应而不清亮
。
此法简单、
快速，
对发酵液污染噬菌体的判断亦较准
确。
但不适于溶源性细菌及温合噬菌体的诊断，
对
侵染噬菌体较少的一级种子培养液
也往往
不适用。

噬菌体的效价即1
mL
样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼
脂平板法。
由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，
一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，
故可
根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，
计算出噬菌体的效价。
此法所形成的噬菌
斑的形态、大小较一致，且清晰度高，故计数比较准确，因而被广泛应用。

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