含有20ug/ml的蛋白酶K，对细菌基因组DNA的PCR反应有影响吗
答案:1 悬赏:70
解决时间 2021-10-13 03:51
- 提问者网友：了了无期
- 2021-10-12 16:49
含有20ug/ml的蛋白酶K，对细菌基因组DNA的PCR反应有影响吗
最佳答案
- 二级知识专家网友：西风乍起
- 2021-10-12 18:16
蛋白酶K的活性还是很强的，需要85度1小时灭活。
如果不灭活直接做PCR，聚合酶活性会被蛋白酶K所抑制。
建议你做PCR之前将含蛋白酶K的DNA模板于水浴85度灭活1小时。这是我们实验室摄取基因组DNA的方法。有时候实验忙，我水浴过2小时3小时，PCR都没有问题。此过程DNA模板可能会有些降解，但对于做一般几百bp一两kB的PCR没什么影响。
有一两次我忘了85度灭活，PCR就P不出来任何东西，说明蛋白酶K的灭活是需要一定时间的，想依靠PCR刚开始那几分钟的95度高温是冒险的。
如果不灭活直接做PCR，聚合酶活性会被蛋白酶K所抑制。
建议你做PCR之前将含蛋白酶K的DNA模板于水浴85度灭活1小时。这是我们实验室摄取基因组DNA的方法。有时候实验忙，我水浴过2小时3小时，PCR都没有问题。此过程DNA模板可能会有些降解，但对于做一般几百bp一两kB的PCR没什么影响。
有一两次我忘了85度灭活，PCR就P不出来任何东西，说明蛋白酶K的灭活是需要一定时间的，想依靠PCR刚开始那几分钟的95度高温是冒险的。
我要举报
如以上回答内容为低俗、色情、不良、暴力、侵权、涉及违法等信息，可以点下面链接进行举报！
点此我要举报以上问答信息！
大家都在看
推荐信息